Сыромятникова Д.С., Егоров А.Н., Гольдерова А.С.
ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ ЭКСТРАКТА INONOTUS OBLIQUUS (PERS.) PIL. ПО ОТНОШЕНИЮ К ЛИНИИ РАКОВЫХ КЛЕТОК HELA *
Аннотация:
в работе получены культуры раковых клеток HeLa и здоровых фибробластов человека, проведен МТТ-анализ цитотоксичности экстракта гриба чаги. Выявлено что на степень цитотоксичности чаги влияет качество используемого сырья – применение некачественных продуктов, препаратов из чаги способно вызвать цитотоксический эффект на нормальные клетки, при этом не вызывая такой же эффект на раковые клетки. Результаты работы и полученные данные имеют значение для дальнейших исследований в области клеточной биологии, фармакологии, а также смежных дисциплин
Ключевые слова:
HeLa, фибробласты, гриб чага, противоопухолевый эффект
УДК 57.085.23
Сыромятникова Д.С.
лаборант-исследователь
Отдел ботанических исследований
Института биологических проблем криолитозоны
ЯНЦ СО РАН
(г. Якутск, Россия)
Егоров А.Н.
инженер – исследователь
Лаборатория медицинских биотехнологий
Медицинский институт
Северо-Восточный федеральный университет им. М.К. Аммосова
(г. Якутск, Россия)
Гольдерова А.С.
доктор медицинских наук, профессор
кафедра "Организация здравоохранения и профилактическая медицина"
Медицинский институт
Северо-Восточный федеральный университет им. М.К. Аммосова
(г. Якутск, Россия)
ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ ЭКСТРАКТА
INONOTUS OBLIQUUS (PERS.) PIL. ПО ОТНОШЕНИЮ
К ЛИНИИ РАКОВЫХ КЛЕТОК HELA
Аннотация: в работе получены культуры раковых клеток HeLa и здоровых фибробластов человека, проведен МТТ-анализ цитотоксичности экстракта гриба чаги. Выявлено что на степень цитотоксичности чаги влияет качество используемого сырья – применение некачественных продуктов, препаратов из чаги способно вызвать цитотоксический эффект на нормальные клетки, при этом не вызывая такой же эффект на раковые клетки. Результаты работы и полученные данные имеют значение для дальнейших исследований в области клеточной биологии, фармакологии, а также смежных дисциплин.
Ключевые слова: HeLa, фибробласты, гриб чага, противоопухолевый эффект.
Трутовик скошенный/чага (Inonotus obliquus (Pers.) Pil.) – паразитический гриб отдела Базидиомицеты, растущий на берёзах. Различные препараты из чаги широко применяются в народной медицине, однако их эффективность не имеет достаточного количества научных доказательств.
По данным производителей препараты обладают следующей фармакодинамикой: регуляция метаболических процессов, повышение общей резистентности организма, общетонизирующее действие. Среди показаний для применения указаны хронический гастрит, дискинезии ЖКТ, также предлагают употреблять препараты для симптоматического лечения при онкологических заболеваниях. К примеру, препарат «Бефунгин» показан при лечении запущенных форм рака IV стадии как симптоматическое средство.
Некоторые авторы выявили цитотоксический эффект некоторых веществ, входящих в состав препаратов. В их число входят тритерпеноиды лупанового ряда: бетулин, бетулиновая и бетулоновая кислоты; также тритерпеноиды ланостанового ряда, среди которых выделяют инотодиол.
Противоопухолевая активность проявляется через цитотоксическое или цитостатическое действие. Цитостатическое действие выражается в нарушении процессов роста, развития, механизма деления клеток, что вызывает апоптоз. При этом апоптозу подвергаются в основном клетки с высоким митотическим индексом. Цитотоксическое действие заключается в повреждении компонентов клеток, которое приводит к некрозу и клеточной смерти.
Поиск и создание эффективных лекарственных противоопухолевых препаратов является актуальной задачей в современной науке. Исследование противоопухолевого эффекта Inonotus obliquus позволяет дополнить имеющиеся данные о целебных свойствах гриба, что способствует дальнейшему изучению проблемы.
Цель ислеоания: изучение цитотоксического эффекта экстракта Inonotus obliquus на линию раковых клеток HeLa.
Материалы и методы. Для сравнения цитотоксического эффекта препарата по отношению к нормальным клеткам и клеткам HeLa были выбраны фибробласты человека. Линия раковых клеток HeLa приобретена у ООО «Биолот». Культивирование проводилось по стандартному протоколу. Выбор обусловлен тем, что нормальные фибробласты, сохраняющие на протяжении всего срока культивирования постоянный диплоидный набор хромосом и характерную морфологию, являются одной из наиболее перспективных тест-систем для биохимико-токсикологических исследований in vitro. Фибробласты были получены добровольно от пациента для научных исследований. Перед получением биоматериала у пациента Х было получено информированное согласие на взятие биоптата и его дальнейшее использование в научных целях, на публикацию научных статей. Транспортировали биоптат в неполной среде DMEM/F12 (Биолот) с 1% содержанием антибиотика-антимикотика (Glibco).
Исследуемый реагент: водный экстракт чаги. Изготовитель: ООО «ЗПК Северная Заимка». Состав: 100% отвар чаги берёзовой, полученный методом вакуумной низкотемпературной варки.
Были изготовлены растворы в разных соотношениях: 1:5 (20%), 1:10 (10%). Также использован экстракт без разведения.
Определение жизнеспособности клеток проводилось с помощью МТТ-анализа с использованием стандартного протокола для проверки процентной жизнеспособности клеток HeLa и фибробластов после обработки экстрактом чаги. Подсчёт клеток проводили на I этапе МТТ-теста с помощью камеры Горяева. Статистический анализ проводился с использованием программы SPSS 23.0 (разработчик StatSoft.Inc). Для сравнения независимых совокупностей ввиду отсутствия признаков нормального распределения данных использовался U-критерий Манна-Уитни.
Результаты МТТ-анализа был представлен в виде следующего графика на Рис.1. Как видно на графике, на оси X отложены контрольные и опытные пробы клеток, на оси Y – оптическая плотность проб. Первые 4 графики представляют фракцию фибробластов, следующие 4 – фракцию раковых клеток HeLa.
Рис.1. Показатели оптической плотности контрольных и опытных проб.
Наибольшее отклонение от показателя контрольной пробы показала проба фибробластов с добавлением экстракта чаги в концентрации 1:1. Выявлен цитотоксический эффект экстракта чаги по отношению к фибробластам человека (Р=0,000; Р=0,003) (Табл.1). Показатели проб раковых клеток HeLa не имеют статистически значимых различий с контрольной пробой.
Таблица 1. Сравнения медиан экспериментальных групп с контрольной
|
Проба |
Соотношение экстракт чаги/общий объём раствора |
Статистическая значимость |
|
Контроль фибробласты |
1/1 |
Р=0,000 |
|
Контроль фибробласты |
1/5 |
Р=0,003 |
|
Контроль фибробласты |
1/10 |
Р=0,003 |
|
Контроль HeLa |
1/1 |
P>0,5 |
|
Контроль HeLa |
1/5 |
P>0,5 |
|
Контроль HeLa |
1/10 |
P>0,5 |
Несмотря на результаты других авторов, в которых подтверждается цитотоксичность экстракта по отношению к раковым клеткам, в данной работе данный эффект не выявлен. Полученные данные показали обратный результат - показатели проб раковых клеток HeLa не имеют статистически значимых различий с контрольной пробой (P>0,5). После обработки клеток экстрактом чаги процентная жизнеспособность снизилась на 4,68%, 7,02% и 7,01% при концентрациях экстракта 100%, 20% и 10% соответственно. По результатам анализа было установлено, что водный экстракт чаги проявляет цитотоксичность по отношению к здоровым фибробластам (Р=0,000; Р=0,003). После обработки клеток экстрактом чаги процентная жизнеспособность снизилась на 46,97%, 25,76% и 29,79% при концентрациях экстракта 100%, 20% и 10% соответственно. Разность процентной жизнеспособности клеток HeLa и фибробластов составляет 42,29%, 18,74% и 22,78% при концентрациях экстракта 100%, 20% и 10% соответственно.
Таким образом, предположительно на степень цитотоксичности экстракта чаги влияет качество используемого сырья – применение некачественных продуктов, препаратов из чаги способно вызвать цитотоксический эффект на нормальные клетки, при этом не вызывая такой же эффект на раковые клетки. Это открывает новые перспективы для изучения биохимических и физиологических свойств чаги.
Список литературы:
Номер журнала Вестник науки №6 (63) том 2
Ссылка для цитирования:
Сыромятникова Д.С., Егоров А.Н., Гольдерова А.С. ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ ЭКСТРАКТА INONOTUS OBLIQUUS (PERS.) PIL. ПО ОТНОШЕНИЮ К ЛИНИИ РАКОВЫХ КЛЕТОК HELA // Вестник науки №6 (63) том 2. С. 924 - 930. 2023 г. ISSN 2712-8849 // Электронный ресурс: https://www.вестник-науки.рф/article/8910 (дата обращения: 17.05.2024 г.)
Вестник науки СМИ ЭЛ № ФС 77 - 84401 © 2023. 16+